微生物定植是人体肠道的关键过程，微生物定植的顺序和时间决定了肠道微生物的组成，影响宿主后期的代谢和免疫。在人体中，肠道屏障功能和免疫的成熟都发生在出生前。与足月婴儿相比，胎儿肠肠道对大分子的渗透性较强，对抗原的耐受性较弱。母体IgG通过胎盘转移和胎儿肠道摄取使胎儿出生后肠道免疫反应初步形成。因此，母体宫内环境影响着胎儿长期的生命健康轨迹。从生命早期特定微生物的定植情况可以预测人体未来的健康结果，包括哮喘和肥胖等。虽然新生儿胎粪是在出生前形成的，但这并不能解释胎儿肠道微生物定植情况。因而，该研究论文旨在了解微生物在人体肠道的定植时间。

为防止阴道分娩对新生儿胎粪微生物的垂直传播影响，选取破腹产生产的足月胎儿的胎粪样本。用直肠拭子法和直肠涂片法收集胎儿粪便。同时进行母体皮肤拭子试验以消除母体皮肤对胎儿粪便微生物的影响。此外收集了出生48h内新生儿粪便样本和6月大婴儿的粪便样本，作为阳性对照。提取粪便基因组DNA，进行16S rRNA V3-V4测序和鉴定，分析肠道微生物多样性。粪便样品在无菌条件下转移并进行厌氧和需氧培养。培养时间最长为120小时，阳性培养物在琼脂培养基上传代培养后进行菌种鉴定。

图1 直肠拭子法收集胎儿粪便

研究人员收集了胎儿胎粪（20例），阴性对照组（5例），新生儿粪便（14例），婴儿粪便（25例）。经ɑ多样性分析发现，胎儿粪便多样性远低于婴儿粪便多样性(P<0.05)，且新生儿粪便的ɑ多样性与婴儿粪便多样性无显著性差异（P>0.05）。

图2 粪便微生物多样性分析

此外，研究人员建立了系统发育树，对比分析各样本微生物组成，发现在胎儿胎粪中检测到的微生物种类与阴性对照中检测到的基本一致，为Halomonas和Rhodanobacter。在胎儿胎粪中检测到的Bacteroides和Staphylococcus未在阴性对照组中检出，而Bacteroides仅在1个样本中检出，Staphylococcus仅在与培养基阳性结果相同的2个样本中检出，研究人员分析后认为，该菌在胎儿胎粪的检出是由母体皮肤污染引起的。

图3 样本微生物系统发育树

    总之，胎儿肠道微生物的定植并不是出生之前就开始的，新生儿的肠道微生物是胎儿出生期间和出生后获得的。

（世联博研(Bioexcellence) 世联博研Bioexcellence）

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